细胞培养基的氨基酸分析
细胞培养物广泛用于生产生物药品和其他生物活性化合物。细胞培养基的组成影响所需产品的产量和结构,必须仔细优化。细胞培养基通常由氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐以及不同肽、蛋白质和其他化合物的混合物组成。随着细胞的生长,它们消耗营养物质,释放目标生物药物以及废物。
氨基酸作为蛋白质的构件,以及许多代谢途径的中间体。通常将氨基酸添加到细胞培养基中,以提供细胞的营养需求。监测和调整氨基酸组成是优化生产工艺以确保最终产品高质量和最佳收率的必要部分。
使用阳离子交换色谱法和柱后茚三酮衍生化进行氨基酸分析,可轻松测定许多复杂基质(包括细胞培养基)中的氨基酸浓度。柱后方法具有非常高的灵敏度、重现性和耐用性。它一直是并且继续是运行生物样品、蛋白质、多肽和食品分析的实验室的首选方法。培养基中存在的大多数化合物不会干扰分析,因此大多数样本在分析前只需要用柠檬酸缓冲液稀释并过滤。如果向培养基中加入血清,则需要使用SeraprepTM溶液或超滤沉淀蛋白。
Pickering提供用于氨基酸分析的完整溶液,包括柱后衍生仪器、色谱柱、洗脱液、试剂和标准品。Onyx PCX衍生系统具有可编程柱温箱,允许更短的运行时间和易于方法优化。
方法
分析条件
色谱柱:高效锂离子交换柱,4.6 x 75 mm,货号 0354675T
保护柱:阳离子交换 GARDTM,目录号 1700-3102
流动相:参见表 1中的方法进样体积:10-50 uL
柱后条件
柱后系统: Onyx PCX或 Pinnacle PCX反应器体积:0.5 mL
反应器温度:130°C
流速: 0.3毫升/分钟
检测:一级氨基酸 UV/VIS 570 nm,二级氨基酸 440 nm
氨基酸标准品的色谱图
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