黄曲霉毒素天然存在于花生、棉籽、玉米和干辣椒以及许多混合或加工食品和饲料中。 重要的帮助是通过含有特定真菌毒素抗体的免疫亲和柱净化提取物。 我们使用简单、灵敏且稳定的  HPLC方法，结合柱后光化学衍生化和荧光检测来分析花生酱和花生粉中的黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2。 UVETM（LCTech，德国）光化学反应器不需要额外的试剂，并且易于安装在  HPLC色谱柱和  FLD检测器之间。 这种方法和仪器可以快速、无干扰地检测低  ppb级的黄曲霉毒素。

项目概况

作为  NIST研究的参与者，我们分析了花生和花生酱样品（表 1、2）。 使用其他  HPLC方法分析黄曲霉毒素的其他四个实验室参与了这项研究。 花生的群落结果如表  2所示。使用 AflaCLEANTM（LCTech，德国）免疫亲和柱对黄曲霉毒素 B1、B2、G1、 G2进行纯化。 制备的样品通过  HPLC分析，使用  UVETM光化学反应器进行柱后光化学衍生。

方法

黄曲霉毒素 B1、G1、B2、 G2的分离

向  20克样品中加入  2克 NaCl、 100毫升萃取溶液（ 80/20甲醇/水）和  50毫升己烷。 高速混合并通过凹槽纸过滤。 在  14 mL的水层中加入  86 mL的  PBS缓冲液 pH 7，充分混合并过滤。 打开  Afla-Clean Immunoaffinity柱并排干储存缓冲液。 加载  11 mL的提取物 /PBS混合物并排至吸附剂床的顶部。 用  10 mL水清洗柱子。用2份 1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素。 将第一部分甲醇留在色谱柱中  5分钟，然后再加入第二部分，以确保黄曲霉毒素与抗体的结合断开。 如下所述分析黄曲霉毒素。

分析条件

分析柱： MYCOTOXTM反相柱，4.6 x 250 mm，P/N 1612124

保护柱：反相保护柱，部件号 18ECG001 

 HPLC洗脱液：磷酸钠缓冲液

（Cat #1700-1108）/甲醇/乙腈  (57/28/15)流速：1 mL/min

进样量： 30μL

FLD：激发 365 nm，发射 430 nm

结果与讨论

黄曲霉毒素 B1、G1、B2、 G2的分离

 B1的  6点校准曲线的范围为  11.49– 0.24 ppb， B2和  G2为  3.29– 0.07 ppb， G1为  9.85– 0.21 ppb， R2超过 0.999。 使用免疫亲和柱净化样品后不存在基质干扰。

所有黄曲霉毒素的结果与经认证的  NIST值以及通过其他方法获得的结果非常一致。

使用  IAC色谱柱和  UVE反应器进行衍生化，我们能够快速有效地检测出低水平的黄曲霉毒素。

UVETM光化学反应器流程图

花生酱  (NIST SRM2387)– 对照样品

磨碎的花生样品

* 5 个参与实验室的结果表示为（最小报告值 – 最大报告值）， ng/g **±  95 % NIST评估值的置信区间

a) 花生粉的色谱图                                                                b) NIST SRM2387花生酱样品

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