草药补充剂和香料的生产是一个快速兴起的行业。不幸的是，原材料通常是从缺乏足够质量控制的国家进口的，其生长季节的天气条件以及不当的收获和储存方法会导致有毒霉菌污染。有大量关于市售草药和香料（例如洋甘菊、黑白茶叶、银杏叶、辣椒粉和孜然）中存在霉菌毒素的报告。

我们开发了一种简单、灵敏且稳定的  HPLC方法，用于分析草药和香料中的黄曲霉毒素 B1、B2、G1、 G2和赭曲霉毒素 A。AflaOTAClean ^TM免疫亲和色谱柱含有针对两类真菌毒素的特异性抗体，可实现快速高效的样品净化。我们使用了AcceClean^TM 自动化工作站，它可以同时处理三个样品。

柱后光化学衍生化用于提高检测黄曲霉毒素B1和G1的灵敏度。 UVETM（LCTech，德国）光化学反应器不需要额外的试剂，并且易于安装在  HPLC色谱柱和荧光检测器之间。赭曲霉毒素  A是一种天然荧光化合物，不需要衍生，可以与所有四种黄曲霉毒素一起进行分析。

方法：黄曲霉毒素 B1、B2、G1、 G2和赭曲霉毒素  A的分离

将  5克精细研磨的样品与萃取液混合

（ 25 mL甲醇：水 80:20、 12.5 mL己烷、0.5 g NaCl）并在机械振荡器上振荡  1小时。 通过凹槽纸过滤提取物。 用  86 mL PBS缓冲液（pH 7.2）稀释  14 mL水层，过滤并以  2 mL/min的流速将  11 mL溶液加到  AflaOTACleanTM免疫亲和柱上。 用 10 mL水以一定流速冲洗色谱柱

 2毫升/分钟。 用两份  1毫升的甲醇以  0.3毫升/分钟的流速洗脱毒素。 在应用第二部分甲醇之前允许  5分钟以确保完全破碎

抗体-毒素键。

分析条件

分析柱： MYCOTOXTM反相柱，4.6 x 250 mm，P/N 1612124

保护柱：反相保护柱，部件号  18ECG001 HPLC洗脱液：磷酸钠缓冲液

（Cat #1700-1108），甲醇，乙腈流速：1 mL/min

柱后光化学反应器：UVETM（Cat # 10519 (240V)、Cat # 10742 (120 V)

进样量： 30μL

FLD：黄曲霉毒素激发 365 nm，发射  430 nm激发 335 nm，赭曲霉毒素  A发射 455 nm

UVETM光化学反应器流程图

HPLC梯度 

结果与讨论

 6点校准曲线的建立范围为B1的 0.12-11.49 ppb，B2和G2的0.04-3.29 ppb，G1的 0.1-9.85 ppb，赭曲霉毒素  A的 0.263-25.23 ppb， R2超过0.999。

紫锥菊、生姜和人参的样品购自当地一家草药店。 这些样品没有自然地受到霉菌毒素的污染。

免疫亲和净化后不存在基质干扰。 样品中加入两种水平的五种霉菌毒素，并与样品空白一起处理，如上所述。 黄曲霉毒素B1、B2、G1、 G2和赭曲霉毒素  A的回收率数据见表 1-3。

人参样品空白。

注意： 17分钟时基线的变化是由于梯度条件和检测器设置的变化。

加标真菌毒素的人参样品。黄曲霉毒素B1-2.53 ng/g、黄曲霉毒素B2-0.72 ng/g、黄曲霉毒素G1-2.16 ng/g、黄曲霉毒素G2-0.72 ng/g、赭曲霉毒素A-5.05 ng/g。

加标霉菌毒素的生姜样品。 黄曲霉毒素B1–5.06 ng/g，黄曲霉毒素B2–1.45 ng/g，黄曲霉毒素 G1–4.33 ng/g，黄曲霉毒素G2–1.45 ng/g，赭曲霉毒素 A–10.1 ng/g。

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