虽然曲霉（黄曲霉毒素、赭曲霉毒素 A）通常与花生有关，镰刀菌（脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮）与小麦有关，但这些真菌和产生其他毒素的真菌没有宿主选择性，因此可以跨植物物种。这种情况由于肉眼可能无法看到微观模具而变得复杂。此外，当加工受感染的谷物时，任何可见的霉菌都会消失，但有毒代谢物会进入成品。因此，对谷物和成品中的毒素进行多残留分析筛选是比单一家庭协议更明智的选择。我们展示了一个单一的屏幕来涵盖五个毒素家族。该方法适用于分析饮料、谷物和饲料。

样品提取和净化

用  150 mL水/甲醇混合物  (30/70)萃取  25 g精细研磨的样品。  20 mL过滤后的提取物用  70 mL磷酸盐缓冲盐水  (PBS)稀释。黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素  A使用  AOZ免疫亲和柱（Vicam，美国）根据柱制造商的程序进行分离。 毒素用  2 x 2 mL甲醇洗脱。 使用  FumoniTest Immunoaffinity柱（Vicam，美国）根据柱制造商的程序分离伏马菌素。 毒素用  2 x 1.5 mL甲醇洗脱。

为了分离 DON，将  3 mL过滤提取物与  6 mL乙腈混合，并根据制造商的说明使用  MycoSep 277色谱柱（Romer Labs，美国）进行清洗。 过滤干净的溶液，将其中的  5.5 mL与来自  AOZ和  FumoniTest色谱柱的洗脱液混合。 将溶液蒸发至 0.5 mL，并用甲醇将最终体积调节至 1 mL。

方法

分析条件

保护柱：反相保护柱，部件号  18ECG001温度：40 ^oC

流速： 1毫升/分钟

流动相：磷酸钠缓冲液，pH 3.5

货号 1700-1108/MeOH/ACN

色谱柱：MYCOTOX^TM 反相色谱柱，4.6 x 250 mm，P/N 1612124

柱后条件

柱后系统： Onyx PCX和  Pinnacle PCX反应器体积：1.4 mL

温度：60℃

试剂：OPA、Thiofluor、 Brij 35® in GA104光化学反应器：UVETM

检测：

荧光

黄曲霉毒素（光化学衍生）λ_ex =365nm；λ_em =455nm

伏马菌素（ OPA柱后衍生） λ_ex =330nm；λ_em =465nm

赭曲霉毒素A

λ_ex =335nm；λ_em =455nm

玉米赤霉烯酮

λ_ex =275nm；λ_em =455nm

 UV/Vis Deoxynivalenolλ=218 nm

霉菌毒素标准溶液的色谱图。 毒素浓度（ng/mL）：脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DON) - 930，黄曲霉毒素B1 - 4.5，黄曲霉毒素B2 - 1.6，黄曲霉毒素G1 - 4.7，黄曲霉毒素G2 - 2，赭曲霉毒素A - 92，玉米赤霉烯酮- 481，-伏马毒素 -47和伏马菌素B2 - 627。

天然被伏马菌素  FB1和  FB2污染并加标  DON的玉米粒样品的色谱图； 黄曲霉毒素 B1、B2、 G1和 G2； 赭曲霉毒素A； 和玉米赤霉烯酮。 样品中的毒素浓度（ng/g）：脱氧雪腐镰刀菌烯醇 - 930、黄曲霉毒素 B1 - 5.0、黄曲霉毒素 B2 - 1.7、黄曲霉毒素 G1 - 5.1、黄曲霉毒素 G2 - 2.2、赭曲霉毒素 A - 102、玉米赤霉烯酮 - 528381、烟曲霉毒素  B和伏马菌素 B2 - 1107。

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