伏马菌素是由镰刀菌属产生的天然存在的真菌毒素。伏马菌素污染在世界范围内发生在许多农产品中，特别是玉米中，通常与干热天气以及随后的高湿度时期有关。在十多种伏马菌素中，伏马菌素FB1的流行率和毒性最高，其次是伏马菌素FB2和FB3。伏马菌素被归类为可能对人类致癌，也会引起动物的健康问题，尤其是马属动物和猪。FDA将人食品中的伏马菌素总限度设定为2-4μg/g，动物饲料中的伏马菌素总限度设定为 5-100μg/g。
由于伏马菌素没有发色团，并且不发出荧光，因此需要衍生化以达到所需的检测灵敏度。我们开发了一种快速灵敏的柱后衍生HPLC方法，能够在低至 0.01μg/g的水平下分析谷物和动物饲料中的伏马菌素。

方法

分析条件

色谱柱：MYCOTOX ^TM反相色谱柱，4.6 x 250 mm，P/N 1612124

保护柱：反相保护柱，部件号  18ECG001温度：40 oC

流速： 0.8毫升/分钟

流动相：洗脱液 A：稀释 1 mL甲酸

到  1 L与  D.I.水 洗脱液 B：MeOH

进样量：10– 50μ L柱后条件

柱后系统：Onyx PCX、 Pinnacle PCX或  Vector PCX加热反应器体积：1.4 mL

温度：65℃

试剂：950 mL GA 104，300 mgs OPA，2 g Thiofluor，

 3 mL 30% Brij 35溶液检测：FLD，λ_ex：335 nm，λ_em：440 nm

样品提取和净化

免疫亲和净化柱：Fumonitest^TM WB (Vicam)

萃取液：水/甲醇 (20/80)

 PBS溶液：用去离子水将  100 mL的 10X PBS（Vicam，P/N G1113）稀释至 1 L

向  25克精细研磨的样品中加入  2.5克  NaCl和  50毫升萃取溶液。 高速混合  5分钟，通过凹槽过滤器过滤。 取  10 mL提取物，加入  40 mL PBS溶液，混合均匀，通过微纤维过滤器过滤。 将  10 mL稀释的提取物装入免疫亲和柱，让溶液以约  1-2滴/秒的流速通过。 用  10 mL的  PBS溶液清洗柱子，用  1 mL甲醇洗脱，然后用  1 mL DI水洗脱。 在氮气流下将溶液蒸发至干，在  1 mL甲醇/水  (50/50)中复溶。注射 10–50 uL。

被  0.17 ug/g FB1和  0.03 ug/g FB2污染的玉米样品的色谱图

被  0.08 ug/g FB1和  0.02 ug/g FB2污染的混合饲料样品的色谱图

添加了  0.2 ug/g FB1和  0.07 ug/g FB2的红花种子样品的色谱图

加入  0.2 ug/g FB1和  0.07 ug/g FB2的大麦样品的色谱图

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