麻痹性贝类毒素是由甲藻沉积在双壳类软体动物中的一组18种次生代谢物。甲藻开花是季节性的，发生在温暖的月份。由于无法预测是否会发生侵染，因此应定期监测贝类种群的毒素。摄入受污染的贝类会导致麻痹性贝类中毒：

一种危及生命的疾病。

用于检测甲藻衍生神经毒素的小鼠生物测定方法具有主要缺点，这导致了对色谱分析方法的探索。最近，在碱性条件下利用柱后氧化毒素的 HPLC 方法已被批准为新的官方 AOAC 方法 – OMA 2011.02。使用单步梯度方法在 C18 色谱柱上分离三组毒素。使用荧光检测器可以高灵敏度地检测毒素柱后衍生的产物，从而确定毒素类型和浓度。我们描述了使用 Pickering Laboratories 的柱后衍生化系统根据 AOAC 方法 2011.02 分析麻痹性贝类毒素。

方法

样品制备

- 将 5 g 均质贝类组织转移到 50 mL 离心管中，并加入 5 mL 0.1 N HCl

- 涡旋混合液，根据需要将 pH 值调整为 2-4 范围内

- 在沸水浴中加热混合物 5 分钟，冷却至室温，并重新检查 pH 值，必要时进行调整

- 将混合物离心并将 500uL上清液转移到微量离心管中

- 加入 25 uL 30% 三氯乙酸 (TCA) 对提取物进行脱蛋白，充分混合并离心

- 用 1M NaOH 调节 pH 值至 pH2-4 的最佳范围

- 通过 0.2um 过滤器过滤并注入分析条件

色谱柱：Zorbax Bonus RP 色谱柱，3.5 um，4.6 x 150 mm（安捷伦科技）

流速：0.8 毫升/分钟

流动相 A：11 mM 庚烷磺酸盐、5.5 mM 磷酸，用氢氧化铵

调节至 pH 7.1

流动相 B：11 mM 庚烷磺酸盐、16.5 mM 磷酸、11.5% 乙腈，用氢氧化铵

调节至 pH 7.1

柱后条件

柱后系统：Onyx PCX、Pinnacle PCX 或 Vector PCX

反应器体积：1.0 毫升

反应器温度：85°C

试剂 1：100 mM 磷酸、5 mM 高碘酸，用 5 M 氢氧化钠调节至 pH 7.8

试剂 2：0.75 M 硝酸

试剂流速：0.4 mL/min

检测：荧光检测器，lex：330 nm，lex：390 nm

天然被麻痹性贝类毒素污染的贻贝样品的色谱图

GTX 和  STX混合毒素标准品的色谱图

致谢：

我们要感谢  Jeffrey van de Riet和 Ryan Gibbs（加拿大食品检验局）对这个项目的帮助。

参考：

(1) van de Riet, J.M., Gibbs, R.S., Chou, F.W., Muggah, P.M., Rourke, W.A., Burns, G., Thomas, K, Quilliam, M.A. (2009) J. AOAC Int. 92, 1690-1704。

 (2) AOAC官方方法 2011.02。 贻贝、蛤蜊、牡蛎和扇贝中的麻痹性贝类毒素。 柱后氧化  (PCOX)方法。

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