柱后衍生 HPLC分析动物饲料中的聚醚抗生素
聚醚抗生素通常用于预防家禽球虫病和其他感染,以及提高肉牛和猪的饲料效率。聚醚抗生素的使用受到严格监管,只有特定的离子载体被批准用于不同动物的饲料。
通过 HPLC与柱后衍生化和 UV/Vis检测对聚醚抗生素进行分析已被证明可以成功地鉴定和定量含药饲料、补充剂和预混剂中的莫能菌素、纳拉菌素和盐霉素,以及确定非含药饲料中的痕量污染水平[1, 2]。
聚醚抗生素的柱后衍生化是使用高酸性香草醛或 DMAB试剂完成的。 Pinnacle PCX衍生系统(Pickering Laboratories, Inc.)具有惰性流路和自动系统清洗功能,使其特别适合处理腐蚀性试剂。建议使用双泵系统以延长试剂稳定性,但也可使用用于此应用的单泵系统。
在仪器中添加荧光检测器允许使用相同的提取程序和 HPLC条件来测定拉沙洛菌素,这不需要柱后衍生。
方法
样品制备
向 25克精细研磨的饲料样品中加入100毫升萃取溶液( 90%甲醇 - 10%水)。使用机械振动器高速振动 1小时。让固体沉淀并过滤注射用提取物的等分试样。如果需要,用萃取溶液稀释以拟合校准曲线。测试预混料时使用 2.5克。
分析条件
分析柱:聚醚柱,C18,4.6 x 250 mm,货号 2381750
保护柱:反相保护柱,货号 18ECG001
温度:40℃
流速: 0.7毫升/分钟
流动相: 90%甲醇, 10%的 5%乙酸水溶液,等度
进样量: 20μ L柱后条件
柱后系统:Onyx PCX、 Pinnacle PCX或 Vector PCX反应器体积:1.4 mL
反应器温度:90°C
试剂 1:浓硫酸 /甲醇 (4:96 v/v)试剂 2: 60 g香兰素和 950 mL甲醇
试剂流速:0.3 mL/min
检测:UV/VIS 570 nm(对于 Lasalocid– FLD,Ex. 322 nm,Em. 370 nm)
校准曲线
莫能菌素 A: 0.1 ppm– 50 ppm, R2 = 0.999莫能菌素 B: 0.0035 ppm– 0.7 ppm, R2 = 0.999拉沙里酸: 0.25 ppm– 50 ppm,R2 = 0.999
莫能菌素、盐霉素和 Narasin 的标准混合物
添加莫能菌素 A (3.44 ug/g) 和莫能菌素 B (0.16 ug/g) 的非药物鸟类饲料样品
含有 72 克/吨拉沙洛菌素的认证药代乳品
含有 267 克/吨莫能菌素的认证加药牛肉饲料样品
结论
使用柱后衍生的 HPLC 分析聚醚抗生素是一种稳健而灵敏的方法,它使用标准设备,并且很容易被测试实验室采用。 它允许测试各种浓度的不同离子载体,包括痕量水平。 使用 Pickering 的柱后衍生化系统,工厂为分析配置,保证稳定和可重现的结果。
参考
1) Campbell, H., Nayeri, G. (2006) J. AOAC Int. 89, 1229-1242, 确定
通过液相色谱法和柱后衍生化处理矿物预混料、补充剂和动物饲料中的莫能菌素、Narasin 和盐霉素:协作研究
2) AOAC 官方方法 997.04。 预混料和动物饲料中的莫能菌素
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