抗氧化剂保护细胞免受自由基的破坏作用，并为人类健康提供许多好处。 在植物中发现的许多酚类化合物以及一些维生素都具有抗氧化活性。 存在几种比色法来测量总抗氧化能力，通常表示为  Trolox或没食子酸等价物。

人们对抗氧化剂的兴趣日益浓厚，因此需要不仅能够确定样品的总抗氧化活性，而且能够识别和量化以生物学益处而著称的单个化合物的方法。 我们的方法摘要表明，众所周知的比色试剂，例如 FC酚法和 和 ABTS，可成功用于分析食品中的抗氧化剂和 通过柱后衍生的  HPLC分析膳食补充剂。

试剂概述

 Folin-Ciocalteu试剂  (FCR)与还原性化合物反应形成可使用  UV/Vis检测器检测的发色团。酚类和非酚类抗氧化剂，包括维生素 C、维生素B1和叶酸，可以使用该试剂以高灵敏度进行分析。许多抗氧化剂可以在溶液中轻松检测到，其浓度低至1微克/毫升。

 ABTS试剂用于  Trolox等效抗氧化能力  (TEAC)测定。该反应基于抗氧化剂对自由基阳离子吸收的抑制，并且可以通过  UV/Vis检测器检测为色谱图上的负峰。这种间接检测方法允许分析浓度在  40到  200μ g/mL之间的常见抗氧化剂。

使用这两种试剂，既可以识别和量化特定目标化合物，也可以通过将色谱图上所有峰的总面积与曲洛司或没食子酸校准曲线进行比较来计算样品的总抗氧化能力。

方法

样品制备

 -新鲜水果：将  10克新鲜水果与  20毫升水/甲醇  (50:50)提取溶液均质  5分钟。 离心并通过  0.45μ m尼龙过滤器过滤

 -干果：将  4克精细研磨的干果与  20毫升  100%甲醇混合。 在机械振动台上振动1小时。 离心并通过  0.45μ m尼龙过滤器过滤。

 -膳食补充剂：将  100毫克精细研磨的样品与  10毫升  100%甲醇混合。 在机械振动器上振动  30分钟。 离心并通过  0.45 um尼龙过滤器过滤。

 -干茶叶：用  25毫升水/甲醇  (50:50)提取溶液将  1克干茶叶均质化  5分钟。 离心并通过  0.45μ m尼龙过滤器过滤。 或者，将  1克干茶叶与  25毫升热水混合，在热板上搅拌  5分钟。 冷却、离心并通过  0.45μ m尼龙过滤器过滤。

 -如果需要，可以用水/甲醇  (50:50)稀释所有提取物。

分析条件

色谱柱：反相 C₁₈ 色谱柱， 4.6x150 mm温度：40 ^oC

流速： 1毫升/分钟

流动相： 4.8%乙酸水溶液，甲醇进样量： 10-50μL

柱后条件

柱后系统：Onyx PCX、 Pinnacle PCX或  Vector PCX反应器体积：1.4 mL

试剂： 选项 1：40%的福林-西奥卡特试剂在水中

选项 2： 15%的  ABTS甲醇库存。  ABTS储备溶液：将  7 mmol/L的 ABTS溶解在  2.45 mmol/L的过硫酸钠水溶液中。 在制备工作试剂之前，储备溶液应在黑暗中储存至少  12小时。

流速： 0.1 mL/min检测：UV/Vis 635 nm

茶氨酸的校准曲线。 浓度范围  0.05-2μm/mL

参考：

Barbara Kusznierewicz、Anita Piasek、Agnieszka Bartoszek、Jacek Namiesnik，“通过  HPLC结合柱后衍生化优化复杂混合物中抗氧化剂常规分析的分析参数”，Phytochem。 Anal。 2011, 22, 392-402

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