硫胺素（维生素 B1）在许多细胞过程中起着重要作用，它的缺乏会迅速导致严重的健康问题。 由于人和动物不能合成维生素B1，所以必须通过饮食获得足够的量。 营养标签的要求导致对不同基质中维生素  B1分析方法的需求增加。

本应用简报介绍了一种灵敏而准确的  HPLC方法，能够测量食品和膳食补充剂中的硫胺素及其生物活性磷酸化衍生物。 硫胺素及其衍生物在反相柱上分离，并通过柱后衍生化转化为高荧光化合物。 为了确定食物中的总维生素  B1含量，采用了与 Taka-淀粉酶的酶促反应将所有硫胺酯转化为游离硫胺素。

方法

样品制备

 -食品样品：向  5 g样品中加入 60 mL 0.1 N HCl，高速混合  2-3分钟，然后在 100 ^oC 下加热混合物

 1小时。 将混合物冷却至室温并使用  2.5 M醋酸钠溶液将  pH值调节至  4.0– 4.5。 加入 200 mg Taka-淀粉酶，摇匀，45 ^oC 孵育 18 h。 酶水解完成后，加入  2 mL 50%三氯乙酸水溶液，在 100 ^oC 下加热  15分钟以沉淀蛋白质。 用醋酸钠将  pH值调节至  2.6– 2.8，并用去离子水将体积调至 100 mL。 通过  0.45μ m过滤器过滤。

 -膳食补充剂：混合至少  10粒胶囊的内容物。 取  250毫克，溶于  100毫升用  0.1 N HCl酸化至  pH 2.6-2.8的去离子水。 根据需要用酸化水进一步稀释溶液以拟合校准曲线。 通过  0.45μ m过滤器过滤。

标准品制备

 -标准溶液：在用  HCl酸化至  pH 2.6–  2.8的水中制备硫胺素及其衍生物的标准溶液。每天新鲜制作。

 -校准范围：硫胺素： 0.1–  25μg/mL，R2=0.999； 焦磷酸硫胺素： 0.02–  5μg/mL，R2=0.999； 硫胺素单磷酸盐： 0.02–  5μg/mL，R2=0.999。

分析条件

分析柱：ThermoHypersil、Aquasil C₁₈

流速： 1毫升/分钟

柱温：40 ^oC

流动相： 10%乙腈  - 90%磷酸盐缓冲液（ 6 g/L磷酸用  NaOH调节至 pH 5.9）

进样量： 10μL

柱后条件

柱后系统：Onyx PCX、 Pinnacle PCX或  Vector PCX反应器体积：0.5 mL

反应器温度：55°C

试剂：40 g/L NaOH、 600 mg/L铁氰化钾

在水里

试剂流速：0.5 mL/min

检测：FLD，Ex 375 nm，Em 430 nm

谷物样品色谱图

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