通过 HPLC和柱后光化学衍生法分析食品和补充剂中的生物可利用烟酸(维生素 B3)
烟酸(烟酸)是一种对人体健康很重要的必需营养素。 游离烟酸和烟酰胺具有相似的生物活性,两者都用作膳食补充剂以预防维生素 B3缺乏症。 在补充剂中,由于没有烟酸的常见副作用,例如皮肤潮红,通常首选使用烟酰胺。
欧洲标准化委员会已批准使用柱后光化学衍生的 HPLC方法来测量食品中的维生素 B3。 紫外线照射将烟酸和烟酰胺转化为高荧光衍生物。 将 Pickering的 UVETM光化学反应器添加到任何 HPLC系统中,可以对各种不同基质中的烟酸和烟酰胺进行高灵敏度和选择性分析。
方法
校准 -校准范围:烟酸: 0.1– 50μg/mL,R2=0.999;烟酰胺: 0.1– 50微克/毫升, R2=0.998样品制备 下面描述的样品制备旨在测量食品中生物可利用的(或游离的)烟酸和烟酰胺。可以采用不同的程序来制备用于总烟酸分析的样品。 -食品样品:向 5 g样品中加入 30 mL 0.1 N HCl。高速搅拌 2-3分钟,然后在 100 oC 下加热混合物 1小时。将混合物冷却至室温,转移到量筒中,并用去离子水将体积调节至 50 mL。根据需要用水进一步稀释以拟合校准曲线。通过 0.45μ m过滤器过滤溶液。 -对于高蛋白/高脂肪基质:按照上述说明进行。过滤后,吸取 4 mL溶液到离心管中。在水中加入 1 mL 50% (w/v)的三氯乙酸溶液以沉淀蛋白质。将混合物在冰水浴中冷却 5分钟。离心并通过 0.45μ m注射器过滤器过滤。 -膳食补充剂:彻底混合至少 10粒细磨胶囊/片剂的内容物。将 100毫克部分溶解在 100毫升的去离子水中。根据需要用水进一步稀释以拟合校准曲线。通过 0.45μ m过滤器过滤。
分析条件
分析柱:ThermoHypersil、Aquasil C18 (150 x 4.6 mm) 温度:40 oC
流速: 1毫升/分钟
流动相:甲醇/磷酸盐缓冲液( 0.035 mol/L磷酸二氢钾调整为 pH值 4.45)。 梯度条件见表 1。
进样量:20 uL
柱后条件
UVETM光化学反应器检测:FLD,Ex 322 nm,Em 370 nm
新鲜番茄样品的色谱图 复合维生素 B 膳食补充剂的色谱图
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