B族维生素是一组水溶性维生素，在细胞代谢中起重要作用。该组由多种化合物组成，包括硫胺

素（维生素 B1）、核黄素（维生素 B2）、烟酸和烟酰胺（维生素 B3）以及吡哆醇和吡哆醛（维生素 B6）。  B族维生素存在于植物和动物食物来源中，例如豆类、坚果、绿叶蔬菜、红肉和家禽。许多商业食品都强化了维生素  B复合物，补充多种维生素是常见的对抗缺陷。

 Pickering提供了一种同时测定补充剂和蛋白粉中维生素 B1、B2、 B3和  B6的方法。该方法使用化学和光化学柱后衍生和荧光检测，可提高分析的灵敏度和选择性。烟酸和烟酰胺需要光化学衍生，硫胺素需要化学衍生。维生素  B2和  B6具有天然荧光。

方法

校准

校准范围：

硫胺素： 0.03–  10微克/毫升；烟酸： 0.125-10微克/毫升；烟酰胺： 0.3–  100微克/毫升；核黄素：0.03-10 ug/mL；吡哆醛： 0.125-10微克/毫升，吡哆醇： 0.125-10微克/毫升。

制作核黄素原液：

将  20 mg核黄素溶解在  5 mL 0.1 M NaOH中，并立即加入 50 mL 0.1 M HCl，并用去离子水将溶液补足至 500 mL。通过用  0.01 M HCl稀释储备溶液来制作工作标准。避光保存。

硫胺素、烟酸、烟酰胺、 Ryridoxal和吡哆醇的库存和工作标准品在  0.01 M HCl中制备并避光储存。

仪器设置

按以下顺序连接仪器：

Onyx PCX柱后衍生仪

–  UVETM光化学反应器 – 荧光检测器。

样品制备

对于蛋白粉：

向  0.5 g样品中加入  50 mL提取缓冲液（0.1 N NaOH，用磷酸调节至 pH 2）。使用手持匀浆器匀浆  30秒，然后在 100 ^oC 的水浴上加热 30分钟。冷却溶液，通过  0.45 um尼龙过滤器过滤并注射。避光。

对于多种维生素补充剂片剂：

将至少  10片药片混合成细粉，然后彻底混合整个样品。称量  250 mg样品并添加 90 mL

的去离子水用  0.1 N HCl酸化至 pH 2.6。使用磁力搅拌板搅拌  2小时，避光。用酸化水定容至 100 mL。通过  0.45 um尼龙过滤器过滤样品并注入。

分析条件

分析柱：Thermo Hypersil、Aquasil C₁₈ (4.6x150 mm) 柱温：40 ^oC

流速： 1毫升/分钟

流动相：

溶剂 A：将  4.77 g磷酸二氢钾溶解在  900 mL去离子水中，用  KOH将  pH值调节至 5.9。 用去离子水将体积调至 1 L。

溶剂B：乙腈。 梯度条件见表 1。 进样量：20 uL

柱后条件

柱后衍生系统：Onyx PCX、Pinnacle PCX

反应器体积： 0.5毫升

反应器温度：30 ^oC

试剂：将10克氢氧化钠溶解在500毫升去离子水中，加入2克亚硫酸钠，混合至完全溶解

试剂流速：初始流速 0 mL/min。 泵程序见表2

检测：FLD，检测程序UVETM光化学反应器见表3

大豆蛋白奶昔粉样

NIST 复合维生素片样品的色谱图                                                                                                      NIST 巧克力蛋白饮料混合物样品的色谱图品色谱图

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