饲料中的糖分分析
HPLC柱后衍生化和荧光检测
在确定营养价值时,动物饲料中糖的种类和含量与蛋白质、矿物质和脂肪的含量一样重要。 我们开发了一种简单而灵敏的 HPLC方法来分析动物饲料中的六种糖类 -蔗糖、果糖、葡萄糖、半乳糖、麦芽糖和乳糖。 柱后衍生试剂将还原糖和非还原糖转化为荧光衍生物,大大提高了检测的灵敏度和选择性。
检查的饲料混合物从谷物/蔬菜产品(牲畜饲料)到肉类/蔬菜产品(宠物食品)不等。
方法
样品制备
将 2.5克饲料样品与 50毫升水混合。 使用水浴加热,同时在 65° C下不断混合 1小时。 离心并通过 0.45 um过滤器过滤。
分析条件
色谱柱:碳水化合物色谱柱, 4.6x150 mm温度: 30°C
流速: 1毫升/分钟
流动相:乙腈/水
进样量: 10 uL– 50 uL柱后条件
柱后系统:Onyx PCX、 Pinnacle PCX或 Vector PCX
反应器体积: 1.4毫升
温度:130℃
试剂 1:盐酸胍 60 mM,溶于 200 mM硼酸,用 KOH调节至 pH 11.5
试剂 2: 1.5 mM高碘酸,用 KOH调节至 pH 11.5
流速: 0.15 mL/min每种试剂
检测:FLD; l ex : 325 nm,l ex : 465 nm
校准
对于果糖、葡萄糖和半乳糖等单糖,观察到相关性 > 0.999的二次校准曲线。 对于麦芽糖、乳糖和蔗糖等二糖,观察到相关性 > 0.999的线性校准曲线。 校准曲线示例如图 1和图 2所示。
果糖的校准曲线 麦芽糖的校准曲线
添加糖的饲料基质 1的色谱图。 糖的总含量:果糖 1.14%、葡萄糖 1.52%、半乳糖 0.69%、蔗糖 6.02%、麦芽糖 1.72%、乳糖 0.6%
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