饲料中的糖分分析

 HPLC柱后衍生化和荧光检测

在确定营养价值时,动物饲料中糖的种类和含量与蛋白质、矿物质和脂肪的含量一样重要。 我们开发了一种简单而灵敏的  HPLC方法来分析动物饲料中的六种糖类  -蔗糖、果糖、葡萄糖、半乳糖、麦芽糖和乳糖。 柱后衍生试剂将还原糖和非还原糖转化为荧光衍生物,大大提高了检测的灵敏度和选择性。

检查的饲料混合物从谷物/蔬菜产品(牲畜饲料)到肉类/蔬菜产品(宠物食品)不等。

 

方法

样品制备

  2.5克饲料样品与  50毫升水混合。 使用水浴加热,同时在 65° C下不断混合  1小时。 离心并通过  0.45 um过滤器过滤。

分析条件

色谱柱:碳水化合物色谱柱, 4.6x150 mm温度: 30°C

流速: 1毫升/分钟

流动相:乙腈/

进样量: 10 uL  50 uL柱后条件

柱后系统:Onyx PCX Pinnacle PCX Vector PCX

反应器体积: 1.4毫升

温度:130

试剂 1:盐酸胍 60 mM,溶于  200 mM硼酸,用  KOH调节至 pH 11.5

试剂 2 1.5 mM高碘酸,用  KOH调节至 pH 11.5

流速: 0.15 mL/min每种试剂

检测:FLD l ex  : 325 nm,l ex : 465 nm

校准

对于果糖、葡萄糖和半乳糖等单糖,观察到相关性  > 0.999的二次校准曲线。 对于麦芽糖、乳糖和蔗糖等二糖,观察到相关性  > 0.999的线性校准曲线。 校准曲线示例如图  1和图  2所示。

果糖的校准曲线                                                                                                麦芽糖的校准曲线       

支持

添加糖的饲料基质  1的色谱图。 糖的总含量:果糖 1.14%、葡萄糖 1.52%、半乳糖 0.69%、蔗糖 6.02%、麦芽糖 1.72%、乳糖 0.6%

糖类标准溶液的色谱图。 果糖 500 ppm、葡萄糖 500 ppm、半乳糖 500 ppm、蔗糖 3000 ppm、麦芽糖 500 ppm、乳糖 500 ppm
饲料基质的色谱图  1.样品中糖的含量:果糖 0.54%、葡萄糖 0.52%、半乳糖 0.09%、蔗糖 4.02%、麦芽糖 1.12%

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