大麻素是一类与大麻药理活性有关的萜酚化合物。对医用大麻使用的更广泛接受增加了对能够确定大麻活性化合物的分析方法的需求。大麻素主要以羧酸的形式存在于植物中，并在储存或制备可食用产品期间通过光和热转化为中性类似物。在  GC分析过程中，酸也会转化为中性类似物，与  HPLC方法相比，这通常会导致结果存在差异。

开发了一种柱后衍生的新型  HPLC方法来分析大麻植物以及含有大麻的可食用产品中的大麻素。这种柱后方法基于在碱性条件下与固蓝盐试剂反应，这是一种众所周知的显色反应，用于药物测试，通过试管方法和薄层色谱法检测大麻素。使用  UV/Vis检测器在  475 nm处进行检测。

我们的方法使用酸化水/乙腈进行简单萃取，然后对  QuEChERS样品进行净化。相同的程序适用于含有大麻的植物材料和可食用产品。该方法适用于分析主要的中性大麻素如THC、CBD、CBN和CBG以及大麻素酸THCA-A和CBDA，具有较高的检测灵敏度和选择性。

方法

分析条件

分析柱：C₁₈ 反相柱， 4.6 x 150 mm保护柱：反相保护柱， P/N 18ECG001柱温：45 ^oC

流速： 1毫升/分钟

流动相： 70%乙腈 –  30%磷酸钠缓冲液 (6 mM) pH 3.5

进样量： 20 uL柱后条件

柱后系统：Onyx PCX、 Pinnacle PCX或  Vector PCX加热反应器体积：1.4 mL

温度：30℃

环境反应器：0.1 mL

试剂 1：将  0.1克固蓝盐溶解在  240毫升去离子水中。 添加  40 mL的  1 N HCl和  720 mL乙腈。 保护试剂避光。 3天内使用。

试剂 2：将  8 g NaOH溶解在  1L去离子水中试剂流速：0.25 mL/min

检测：UV/VIS 475 nm

为避免老化试剂沉淀，定期用  49 : 49 : 2冲洗柱后系统 – 水  :甲醇 : 0.1N HCl

样品制备耗材

萃取液：含1%醋酸的乙腈/水(50:50)

 Q-SEP QuEChERS萃取盐：Restek，目录号 26238（ AOAC 2007.01方法）

样品提取和净化

使用  0.1–  0.2 g样本量分析植物材料，使用  0.2–  0.5g样本量分析可食用产品。将匀浆后的样品放入  50 mL离心管中，加入  30 mL萃取液。使用手持式搅拌机搅拌  1分钟。对于糖果、咀嚼物和其他硬质或粘性产品，在混合前让溶液静置  30分钟。摇动混合提取物

使用机械摇床  30分钟。

将样品以  4,000 rpm的速度离心  10分钟，倾析并保存提取物。用新鲜的  30 mL提取溶液重复提取。离心，倒出提取物并将其与第一部分混合。

将  30 mL的组合提取物放入  50 mL离心管中。根据制造说明将  Q-Sep QuEChERS提取盐添加到每个离心管中。剧烈摇晃  1分钟。将样品以  4,000 rpm的速度离心  10分钟。使用上层进行分析。注射前通过  0.45尼龙过滤器过滤。如果需要，用甲醇稀释样品以拟合校准曲线。

萃取效率研究

由于大麻素标准品的可用性和价格限制，加标回收率研究对于评估提取效率是不切实际的。我们对每个样品进行了  3次重新提取，以验证提取程序。结果表明，用两份  30毫升的提取溶液进行提取足以提取超过  97.5%的大麻素。由于样品中大麻素的含量相对较高，而且该方法具有较高的灵敏度，因此重复提取对提取物的额外稀释不会对分析产生负面影响。

校准

分析了以下大麻素： delta-9四氢大麻酚 (THC)、大麻酚 (CBN)、大麻二酚 (CBD)、大麻二酚 (CBG)、大麻二酚 (CBC)、 delta-9四氢大麻酚酸  A (THCA-A )和大麻二酚酸 (CBDA)。

校准品是通过用甲醇稀释市售大麻素标准品来制备的。使用了以下校准范围：CBG、CBD、CBN、 THC和  CBDA为  1 ppm至 75 ppm；  THCA-A和  CBC为  5 ppm至 75 ppm。所有校准曲线的相关系数  R2均超过  0.999值。

大麻和含大麻的食用产品中的大麻素分析

为了展示方法能力，该方法被用于分析医用大麻产品中的大麻素：干大麻花序、市售预卷、医用大麻巧克力饼干和医用大麻无糖咀嚼物。

正如预期的那样，用干植物材料制成的大麻花序和预卷含有高水平的大麻素酸 (THCA-A)。 干植物材料也可能含有大麻二酚酸 (CBDA)，但尚未在任何样品中检测到这种化合物。

大麻花序色谱图

含有大麻的巧克力曲奇饼干样品的色谱图​

市售预卷样品的色谱图

含大麻咀嚼物的色谱图

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